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批准华中农业大学等5家单位申报的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒产品注册

中华人民共和国农业农村部公告第号

农业农村部畜牧兽医局根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准华中农业大学等5家单位申报的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒产品注册，并发布产品试行规程、质量标准、说明书和内包装标签。自发布之日起执行。特此公告。附件：1.注册目录2.制造及检验试行规程3.质量标准4.说明书和内包装标签农业农村部年8月18日附件1注册目录

附件：说明书和标签.doc

附件2（略）附件3（略）附件4

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒说明书和内包装标签

一、非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒说明书兽用通用名非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒商品名无英文名Real–timePCRKitforDetectionofAfricanSwineFeverVirus汉语拼音FeizhouzhuwenbingduyingguangPCRJianceShijihe组分数量样品裂解液1.5ml/管×2管或1.5ml/管×4管PCR反应液μl/管×1管或μl/管×2管DNA酶混合液50μl/管×1管或μl/管×1管阳性对照μl/管×1管或μl/管×1管阴性对照μl/管×1管或μl/管×1管内标50μl/管×1管或μl/管×1管用于猪血清、血浆、脾脏、淋巴结、扁桃体等样本中的非洲猪瘟病毒核酸检测。1用法1.1样本处理1.1.1组织样品前处理取1g组织病料于研磨器具中，加入无菌生理盐水5ml，样品取样量重量/体积比为1/5（g/ml），研磨匀浆后将组织悬液转移至无菌离心管，r/min离心2分钟，取上清待用。1.1.2血液样品前处理血清、血浆无需预处理，保存待用；严重溶血的血清、血浆和其它复杂样品类型建议使用商品化病毒核酸提取试剂盒进行DNA的提取和纯化。1.2核酸提取（直接裂解法）吸取样品裂解液μl于1.5ml离心管中，加入经前处理的组织匀浆上清或血清、血浆等样品20μl，充分混匀后95℃处理10分钟，然后10r/min离心1分钟，取上清作为模板进行扩增。注意裂解上清应尽快进行后续试验。样本也可以使用商业化病毒核酸提取试剂盒进行DNA的提取和纯化。1.3反应体系配制1.3.1取出包装盒中的各组分（酶除外），室温放置，待其温度平衡至室温，混匀后瞬时离心备用。1.3.2在灭菌的1.5ml离心管中制备符合试验样本数量（包括阳性对照、阴性对照）的PCR混合液（至少额外多制备一个反应的量）。单反应按下表比例配制，充分混匀成PCR混合液，瞬时离心备用。配制步骤试剂组分加入体积/反应1PCR反应液37.5μl2DNA酶混合液2μl3内标0.5μl1.3.3根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量准备反应管，向每个反应管加入PCR混合液40μl。1.3.4吸取已处理的样本DNA、阴性对照、阳性对照各10μl加入对应反应管，盖好管盖。1.4PCR扩增1.4.1将PCR反应管放入扩增仪样品槽，按对应顺序设置阴性对照、阳性对照及待测样本名称。1.4.2设置反应体系为50μl，选择FAM通道检测ASFV核酸，选择HEX通道检测内标，反应程序如下∶步骤温度时间循环数1Taq酶活化95℃2分钟12变性95℃3秒40退火，延伸，荧光采集60℃20秒2判定2.1试验成立条件阴、阳性对照HEX检测通道Ct值≤35，且均出现典型的扩增曲线；阴性对照FAM通道无Ct值显示且无典型扩增曲线；阳性对照FAM通道Ct值≤30，且出现典型的扩增曲线。以上要求需要在同一次试验中同时满足，否则本次试验无效，需重新进行。2.2结果判定阈值线依据仪器噪声情况进行调整，以刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点为准。根据扩增Ct值与扩增曲线进行结果判定。2.2.1HEX通道Ct≤35，且有明显扩增曲线，对样本进行结果判定∶2.2.1.1FAM通道Ct≤35，且有明显扩增曲线，该样品判为阳性；2.2.1.＜FAM通道Ct值＜40，该样品判为可疑，可疑的样品复检一次，根据复检结果进行判定，如仍为可疑，则判为阳性；2.2.1.3FAM通道无Ct值，且无明显扩增曲线，则判为阴性。2.2.2如出现其它情形该样本判为无效结果，需重复检验。（1）试验前请熟悉和掌握需使用的各种仪器的操作方法和注意事项，对每次试验进行质量控制。（2）实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培训，试验过程严格分区进行，所用消耗品应灭菌后一次性使用，试验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用。（3）所有的试剂在使用前，均需在室温下充分融化、混匀后使用，使用完后放回-15℃以下。（4）不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂交叉污染。（5）在操作过程中移液时，尽量避免将气泡加入检测孔中。（6）试剂盒中各组分应避免反复冻融。（7）对样品及其废弃物的操作应严格遵守生物安全规定。（8）本试剂盒仅供兽医及相关专业人士使用。（1）25检测/盒（2）50检测/盒-15℃以下避光保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用二、非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒内包装标签兽用非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒25（50）检测/盒批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下避光保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用样品裂解液1.5ml/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用PCR反应液μl/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下避光保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用DNA酶混合液50（）μl/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用阳性对照（）μl/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用阴性对照（）μl/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用兽用内标50（）μl/管批准文号∶批号∶有效期至∶详见说明书。-15℃以下保存，有效期为12个月。仅供兽医诊断使用

来源：农业农村部

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